Etxt отзывы о сайте: Etxt.ru — отзывы о бирже копирайтинга

Анализируйте свой контент на предмет SEO с помощью наших инструментов текстовой аналитики

Наши бесплатное программное обеспечение поможет вам понять, как машины и люди могут интерпретировать свой текст, что может помочь вам улучшить свои навыки написания для SEO.Анализируя текст на предмет читабельности, слово количество и частота, а также плотность ключевых слов, вы можете понять, как поисковая система может видеть ваш текст.

Счетчик слов и проверка частоты

Марка уверен, что вы достигаете цели, когда пишете, с точным анализ количества используемых вами слов. Изучите нашу плотность ключевых слов отчеты для анализа частоты использования ключевых слов и настройки вашего контента чтобы он был удобочитаемым, а ваш контент не был чрезмерно оптимизирован для конкретных термины.

ср удалите все знаки препинания, от точек и двоеточий до дефисов и запятые. Как только это будет сделано, мы удалим все лишние пробелы, а затем посчитайте пробелы между словами. Это дает нам точный подсчет слова, буквы и другие символы в вашем тексте.

Сколько слов в среднем предложении?

Вкл. в среднем мы ожидаем, что предложение будет содержать 20 слов. Но среднее письмо скучный. Хорошее письмо должно быть разным по темпу и длине, чтобы читатель заинтересован и удерживает его внимание дольше.Это особенно важно в Интернете, где люди, как правило, бегло читают.

Когда предложение становится слишком длинным?

Иногда необходимы длинные предложения. Но это может усложнить читателю переваривать, если вы запихиваете слишком много слов в один прием, как мы намеренно здесь делаю — по мере того, как становится труднее читать увеличивается, и вы можете найти вас ..

Поэтому мы рекомендуем оставить предложения короче, если можете. Вы хотите, чтобы ваше письмо доставляло удовольствие, поэтому не усложняйте вещи.Просто используйте меньше слов.

Какое идеальное количество слов для сообщения в блоге?

Есть На самом деле нет однозначного ответа на вопрос об идеальной длине идеального сообщения в блоге. Ваша статья должна попытаться охватить тему достаточно глубоко, чтобы сохранить ее интересно и познавательно для читателей. В зависимости от темы это может состоять всего из 300 или 500 слов, или может потребоваться более длинное эссе, например, 1000, 2000 или даже 5000 слов.

Если вы не оплачивается по слову, вы действительно должны стремиться писать четко и лаконично.Нет смысла писать 1000 слов на идеальном слове. посчитайте, и вам это тоже не понравится. Но если бы мы поговорили о том, как чтобы написать для SEO, мы могли бы, вероятно, обработать 10 000 слов и все еще иметь что сказать.

Что такое плотность ключевых слов?

Ключевое слово плотность — это мера того, как часто используется ключевое слово или фраза (для например, «дешевые диваны») встречается на странице. Раньше он использовался оптимизаторами поисковых систем для определить, насколько хорошо было «оптимизировано» их содержание. В одной точке поиск двигатели были довольно простыми машинами, и вы могли оказаться выше на просто повторяя ваше основное ключевое слово чаще, чем у конкурентов.

Это больше не работает.

Как рассчитывается плотность ключевых слов?

Расчет плотность ключевых слов использует очень простую формулу. Все, что вам нужно сделать, это подсчитайте, сколько раз ключевое слово или фраза встречается в тексте, и разделить на общее количество слов на странице. Например, если я упоминаю «ключевое слово» 100 раз в эта статья, а моя статья в 1000 раз длиннее, моя плотность ключевых слов будет 10%. А мою статью было бы практически нечитабельно!

Итак, какова идеальная плотность ключевых слов при написании онлайн?

Там нет идеальной плотности ключевых слов, нет магического числа, которое повысит ваш рейтинг выше в гугле.Иногда люди приводят цифру 1-2%, что является не является необоснованным — и, конечно же, что-либо более 2% может считаться немного спама. Но это неверно.

Поисковые системы имеют были частью нашей жизни на протяжении десятилетий, и у них есть одни из самых умных люди в мире работают на них. Их подход к пониманию вашего article — это не просто подсчет слов на странице.

Вместо достали калькулятор и сантиметровую ленту, теперь они используют продвинутые техники машинного обучения.Область понимания естественного языка зашло так далеко, что теперь компьютер может легко извлечь смысл статьи с использованием ИИ. Это означает, вместо того, чтобы считать слово частоты, они стремятся проанализировать, отвечает ли ваша статья вопрос, который задает поисковик.

Использование инструмента анализа плотности ключевых слов для оптимизации контента

Использование плотность ключевых слов — довольно устаревший подход к оптимизации вашего контент для SEO — в большинстве случаев вы захотите написать свой текст для людей, а не одержимость точной частотой ключевого слова Применение.Маловероятно, что вы сможете найти «идеальную» плотность ключевых слов для ранжирования ваши страницы по вашим целевым ключевым словам, поскольку показатели релевантности Google так сильно продвинулись за последние годы.

Тем не менее, мы все еще чувствуем анализ плотности ключевых слов помогает избежать чрезмерного использования конкретные термины и фразы в вашем тексте. Избегая «избыточного количества ключевых слов» или чрезмерное использование определенных фраз, чтобы не запутаться алгоритмические фильтры или штрафы.

Вы меня поймали. Это ловушка!

я действительно хотят помочь людям добиться успеха в Интернете с помощью SEO и понять, как чтобы правильно оптимизировать контент своего веб-сайта для повышения рейтинга.От создание инструмента и статьи, объясняющей плюсы (и многие минусы!) плотность ключевых слов, я могу помочь людям найти более эффективные техники.

Честно говоря, я думаю, что мы все слишком долго задерживаемся экраны. Если я могу помочь кому-то там тратить меньше времени на оптимизацию их коэффициенты плотности ключевых слов, и сделать их стратегии SEO более эффективно, мы все можем пойти домой и сыграть раньше.

Как провести SEO-анализ ключевых слов в 2020 году с помощью анализа сущностей и тем

A гораздо лучший подход — анализировать ваш контент в контексте результаты поиска, на которые вы нацеливаетесь.Имитируя использование Google Natural Обработка языков (разновидность искусственного интеллекта, посвященная понимая формулировки, которые мы используем) и учитывая использование вами объектов и темы по сравнению со страницами ваших конкурентов, вы можете разработать понимание того, как сделать ваш контент более актуальным.

Google технология информационного поиска далеко ушла от простых анализ частоты слов и оценка плотности ключевых слов, и пришло время для нашего SEO стратегии тоже. Их использование машинного обучения значительно повысили их способность понимать естественный язык.Используя те же процессы, которые они разработали для извлечения смысла и знаний из контента, мы можем проводить сравнения и видеть закономерности в источниках, которые они выбирают продвижение в своих результатах поиска. Мы можем использовать эти знания для улучшить семантическую релевантность нашей работы и лучше передать тема и контекст нашего текста для наших клиентов и поисковых систем одинаково.

Вы должны охватывать те же темы и объекты в своем тексте как и другие страницы в вашей нише, чтобы ваш контент не пропустил важная информация, которую ищут поисковики.Такие инструменты, как SEO Scout использует распознавание именованных сущностей для анализа конкурирующих страниц и предлагать способы, в которых ваш собственный контент может быть недостаточно подробным и контекст.

Когда вы анализируете лучшие результаты по вашим ключевым словам, служба SEO Scout генерирует ряд аналитических данных на основе контента. попал в первую тридцатку результатов по вашему ключевому слову. С использованием информация, извлеченная из статьи, находится в верхней позиции, в в сочетании с алгоритмами понимания естественного языка, это можно предсказать, какие темы и связанные объекты Google ожидает найти в своем тексте.Написание более подробных статей по этим темам в рамках вашего статья — отличный способ повысить общую релевантность вашего кусок, который помог многим оптимизаторам поисковых систем улучшить свои позиции в поиске. двигатели. Это также может значительно увеличить количество ключевых слов с длинным хвостом, по которым ваша страница может ранжироваться

Улучшение вашего письма с помощью оценок читабельности

писать для SEO или для Интернета в целом, жизненно важно, чтобы вы идеи четко изложены в вашем тексте. Интервал внимания ограничен, и сложные предложения могут убить конверсию.

Мы используем Flesh Kinkaid оценка легкости чтения для оценки читабельности вашего контента. Это может быть представлены в процентах, где высокий балл означает, что легче читать, или как класс. Уровень обучения означает, сколько лет школы вам нужно будет прочитать текст. Чем ниже уровень, тем лучше для всем читателям , независимо от их уровня образования!

оценка рассчитывается на основе таких факторов, как количество слов — или слоги — за предложение.Подсчитывая количество слов или слогов за предложении, мы получаем меру того, насколько сложен текст для чтения.

Кому Чтобы улучшить читаемость, вам нужно писать более короткие предложения. Ты следует избегать использования сложные фразы. Короче и проще язык помогает легче донести свою точку зрения. Чем меньше читателю нужно думать, тем больше вероятность, что они прочитают ваше письмо. Если вам нужно использовать более длинные слова, постарайтесь сохранить предложения короткие.

Как а также анализирует плотность ваших ключевых слов, количество слов и другой текст Analytics, мы автоматически проверяем, насколько легко ваш контент читается.Просто вставьте свою статью в поле выше, и мы проверим, нет ли трудностей. слова и трудночитаемые предложения. Оценки читабельности рассчитываются с использованием алгоритма чтения Востока Флеша-Кинкейда и дополненного аналогичные показатели, такие как индекс SMOG, индекс автоматизированной читаемости, Ганнинг Фог и Колман Лиау забивают.

Вам действительно нужны все те? Скорее всего, нет — любая оценка за легкость чтения должна помочь вам понять где ваш контент становится слишком сложным. Но нам нравится быть полными 🙂

Липосома: классификация, приготовление и применение | Письма о наноразмерных исследованиях

Введение

Липосомы — это небольшие искусственные пузырьки сферической формы, которые могут быть созданы из холестерина и природных нетоксичных фосфолипидов.Из-за своего размера и гидрофобного и гидрофильного характера (помимо биосовместимости) липосомы являются многообещающими системами для доставки лекарств. Свойства липосом значительно различаются в зависимости от липидного состава, заряда поверхности, размера и метода приготовления (Таблица 1). Кроме того, выбор двухслойных компонентов определяет «жесткость» или «текучесть» и заряд бислоя. Например, ненасыщенные виды фосфатидилхолина из природных источников (фосфатидилхолин из яиц или сои) дают гораздо более проницаемые и менее стабильные бислои, тогда как насыщенные фосфолипиды с длинными ацильными цепями (например, дипальмитоилфосфатидилхолин) образуют жесткую, довольно непроницаемую двухслойную структуру [1– 3].

Было показано, что фосфолипиды импульсивно образуют замкнутые структуры при их гидратации в водных растворах. Такие везикулы, которые имеют одну или несколько фосфолипидных двухслойных мембран, могут транспортировать водные или липидные лекарственные средства, в зависимости от природы этих лекарств. Поскольку липиды являются амфипатическими (как гидрофобными, так и гидрофильными) в водных средах, их термодинамические фазовые свойства и характеристики самосборки влияют на энтропийно сфокусированную конфискацию их гидрофобных участков в сферические бислои.Эти слои называются ламелями [4]. Обычно липосомы представляют собой сферические везикулы с размером частиц от 30 нм до нескольких микрометров. Они состоят из одного или нескольких липидных бислоев, окружающих водные единицы, где полярные головные группы ориентированы на пути внутренней и внешней водных фаз. С другой стороны, самоагрегация полярных липидов не ограничивается обычными двухслойными структурами, которые зависят от формы молекул, температуры, окружающей среды и условий приготовления, но могут самособираться в различные типы коллоидных частиц [5].

Липосомы широко используются в качестве носителей для множества молекул в косметической и фармацевтической промышленности. Кроме того, пищевая и сельскохозяйственная промышленность тщательно изучали использование инкапсуляции липосом для выращивания систем доставки, которые могут улавливать нестабильные соединения (например, противомикробные препараты, антиоксиданты, ароматизаторы и биоактивные элементы) и защищать их функциональность. Липосомы могут улавливать как гидрофобные, так и гидрофильные соединения, избегать разложения захваченных комбинаций и высвобождать захваченные в определенных целях [6–8].

Благодаря своей биосовместимости, биоразлагаемости, низкой токсичности и способности улавливать как гидрофильные, так и липофильные лекарственные средства [9] и упрощать сайт-специфичную доставку лекарств в опухолевые ткани [10], липосомы стали популярнее как в качестве исследовательской системы, так и в коммерческом плане. система доставки лекарств. Многие исследования липосом были проведены с целью снижения токсичности лекарств и / или нацеливания на определенные клетки [11–13].

Технология липосомальной инкапсуляции (LET) — это новейший метод доставки, используемый медицинскими исследователями для передачи лекарств, которые действуют как лечебные промоторы, к гарантированным органам тела.Эта форма предложения системы доставки нацелена на доставку жизненно важных комбинаций в организм. LET — это метод получения субмикроскопических пен, называемых липосомами, которые инкапсулируют множество материалов. Эти «липосомы» образуют барьер вокруг своего содержимого, устойчивый к ферментам во рту и желудке, щелочным растворам, пищеварительным сокам, солям желчных кислот и кишечной флоре, которые образуются в организме человека, а также к свободным радикалам. Таким образом, содержимое липосом защищено от окисления и разложения.Этот защитный фосфолипидный экран или барьер остается неповрежденным до тех пор, пока содержимое липосомы не будет доставлено в конкретную целевую железу, орган или систему, где это содержимое будет использоваться [14].

В настоящее время клинические лекарства содержат чрезвычайно широкий диапазон используемых лекарственных молекул, и каждый год к этому списку добавляются новые лекарства. Одна из основных целей любого лечения с использованием лекарств — повысить терапевтический индекс лекарства при минимизации его побочных эффектов. Клиническая применимость большинства консервативных химиотерапевтических средств ограничена либо неспособностью доставить терапевтические концентрации лекарственного средства в мягкие ткани-мишени, либо спартанскими и вредными токсическими побочными эффектами на нормальные органы и ткани.Были предложены различные подходы к преодолению этих трудностей путем обеспечения «выборочной» доставки в целевую область; Идеальным решением было бы направить лекарство только на те клетки, ткани, органы, которые поражены болезнью. Выбранные носители, например коллоидные частицы и молекулярные конъюгаты, могут подходить для этого определения. Коллоидные частицы возникают в результате физического включения лекарственного средства в коллоидную систему частиц, например обратные мицеллы, шумовые частицы, микросферы и наносферы, эритроциты, а также полимеры и липосомы.Среди этих носителей липосомы наиболее изучены. Их привлекательность заключается в их составе, который делает их биоразлагаемыми и биосовместимыми. Липосома включает водное ядро, заключенное в один или несколько бислоев, состоящих из природных или синтетических липидов. Они состоят из природных фосфолипидов, которые являются биологически инертными и слабо иммуногенными, а также обладают низкой присущей им токсичностью. Кроме того, лекарства с различной липофильностью могут быть инкапсулированы в липосомы: сильно липофильные лекарства почти полностью захватываются в липидном бислое, сильно гидрофильные лекарства полностью располагаются в водном отсеке, а лекарства с промежуточным logP легко распределяются между липидной и водной фазами, и то и другое. в бислое и в водном ядре [15].

В настоящем обзоре кратко объясняются характеристики липосом и исследуются связанные проблемы и предлагаемые решения, уделяя особое внимание приготовлению липосом, характеристикам, влияющим факторам, преимуществам и недостаткам. В частности, мы возвращаемся к литературе, относящейся к высокостабильным липосомам с длительной циркуляцией (скрытые липосомы) и областям их применения.

Классификация липосом

Размер липосом может варьироваться от очень маленького (0.025 мкм) до крупных (2,5 мкм) пузырьков. Более того, липосомы могут иметь однослойные или двухслойные мембраны. Размер везикул является важным параметром при определении периода полужизни липосом в циркуляции, и размер и количество бислоев влияют на количество инкапсулированного лекарственного средства в липосомах. В зависимости от размера и количества бислоев липосомы можно также разделить на две категории: (1) многослойные везикулы (MLV) и (2) однослойные везикулы. Однослойные везикулы также можно разделить на две категории: (1) большие однослойные везикулы (LUV) и (2) маленькие однослойные везикулы (SUV) [16].В однослойных липосомах везикула имеет единственную двухслойную фосфолипидную сферу, охватывающую водный раствор. В многослойных липосомах везикулы имеют луковичную структуру. Классически несколько однослойных пузырьков образуются внутри друг друга с меньшим размером, образуя многослойную структуру из концентрических фосфолипидных сфер, разделенных слоями воды [17].

Способы получения липосом

Общие методы получения

Все способы получения липосом включают четыре основных этапа:

1. 1.

   Высыхание липидов из органического растворителя.

2. 2.

   Диспергирование липидов в водной среде.

3. 3.

   Очистка полученных липосом.

4. 4.

   Анализ конечного продукта.

Способ приготовления липосом и загрузка лекарственного средства

Для приготовления липосом используются следующие методы:

1. 1.

   Техника пассивного нагружения

2. 2.

   Техника активного нагружения.

Пассивные методы загрузки включают три различных метода:

1. 1.

   Метод механического диспергирования.

2. 2.

   Метод диспергирования в растворителе.

3. 3.

   Метод удаления моющего средства (удаление некапсулированного материала) [18, 19].

Метод механического диспергирования

Типы методов механического диспергирования:

1.1. Обработка ультразвуком.

1.2. Французская ячейка давления: экструзия.

1.3. Липосомы, размороженные замораживанием.

1.4. Увлажнение липидной пленки ручным встряхиванием, не руками. встряхивание или сублимационная сушка.

1.5. Микроэмульгирование.

1.6. Мембранная экструзия.

1,7. Высушенные восстановленные везикулы [18, 19].

Обработка ультразвуком

Обработка ультразвуком, пожалуй, наиболее широко используемый метод для подготовки внедорожников. Здесь MLV обрабатываются ультразвуком либо с помощью ультразвукового устройства типа ванны, либо с помощью ультразвукового зонда в пассивной атмосфере. Основными недостатками этого метода являются очень низкий внутренний объем / эффективность инкапсуляции, возможное разложение фосфолипидов и соединений, которые должны быть инкапсулированы, устранение больших молекул, загрязнение металлическими частицами кончика зонда и присутствие MLV вместе с SUV [18].

Есть два метода обработки ультразвуком:

1. а)

   Зонд ультразвуковой обработки. Наконечник ультразвукового устройства непосредственно погружается в липосомную дисперсию. Энергетический вклад в липидную дисперсию в этом методе очень высок. Связь энергии на кончике приводит к локальному нагреву; поэтому сосуд необходимо погрузить в водяную / ледяную баню. За время обработки ультразвуком до 1 часа можно деэтерифицировать более 5% липидов.Кроме того, при использовании ультразвукового зонда титан будет отслаиваться и загрязнять раствор.

2. б)

   Обработка ванн ультразвуком. Липосомную дисперсию в цилиндре помещают в ванну для обработки ультразвуком. В этом методе обычно легче контролировать температуру липидной дисперсии, в отличие от обработки ультразвуком путем диспергирования непосредственно с помощью наконечника.Материал, подвергаемый ультразвуковой обработке, можно защитить в стерильном сосуде, отличном от зондового блока, или в инертной атмосфере [20].

Французская ячейка под давлением: экструзия

Французская ячейка под давлением включает экструзию MLV через небольшое отверстие [18]. Важной особенностью метода везикул французского пресса является то, что белки не кажутся такими претенциозными во время процедуры, как при обработке ультразвуком [21].Интересный комментарий заключается в том, что пузырьки французского пресса, по-видимому, вспоминают захваченные растворенные вещества значительно дольше, чем SUV, полученные обработкой ультразвуком или удалением детергента [22–24].

Метод предполагает бережное обращение с нестабильными материалами. Метод имеет ряд преимуществ перед методом обработки ультразвуком [25]. Полученные липосомы намного больше, чем внедорожники, обработанные ультразвуком. Недостатками метода являются трудность достижения высокой температуры и сравнительно небольшие рабочие объемы (максимум около 50 мл) [18, 19].

Липосомы, размороженные замораживанием

SUV быстро замораживаются и медленно размораживаются. Кратковременная обработка ультразвуком диспергирует агрегированные материалы до LUV. Создание однослойных пузырьков происходит в результате слияния SUV в процессе замораживания и оттаивания [26–28]. Этот тип синтеза сильно подавляется увеличением концентрации фосфолипидов и увеличением ионной силы среды. Достигнута эффективность инкапсуляции от 20% до 30% [26].

Метод диспергирования в растворителе

Впрыскивание эфира (испарение растворителя)

Раствор липидов, растворенных в диэтиловом эфире или смеси эфир-метанол, постепенно вводят в водный раствор материала, подлежащего инкапсуляции, при температуре от 55 ° C до 65 ° C или при пониженном давлении.Последующее удаление эфира в вакууме приводит к созданию липосом. Основными недостатками метода являются неоднородность популяции (от 70 до 200 нм) и воздействие на инкапсулируемые соединения органических растворителей при высокой температуре [29, 30].

Этанол для инъекций

Липидный раствор этанола быстро вводится до огромного избытка буфера. Сразу формируются MLV. Недостатки метода заключаются в том, что популяция неоднородна (от 30 до 110 нм), липосомы очень разбавлены, удаление всего этанола затруднено, потому что он превращается в азеотроп с водой, и вероятность того, что различные биологически активные макромолекулы будут инактивированы в наличие даже небольших количеств этанола велико [31].

Метод испарения с обращенной фазой

Этот метод обеспечил прогресс в липосомной технологии, поскольку он впервые позволил приготовить липосомы с высоким отношением водного пространства к липидам и способностью улавливать большой процент водного материала. представлен. Обратно-фазовое испарение основано на создании перевернутых мицелл. Эти перевернутые мицеллы образуются при обработке ультразвуком смеси забуференной водной фазы, которая содержит водорастворимые молекулы, которые должны быть инкапсулированы в липосомы, и органической фазы, в которой солюбилизируются амфифильные молекулы.Медленное удаление органического растворителя приводит к превращению этих перевернутых мицелл в вязкое состояние и гелеобразную форму. В критический момент этого процесса состояние геля разрушается, и некоторые из инвертированных мицелл нарушаются. Избыток фосфолипидов в окружающей среде способствует образованию полного бислоя вокруг остаточных мицелл, что приводит к образованию липосом. Липосомы, полученные методом испарения с обращенной фазой, могут быть изготовлены из множества липидных составов и иметь отношение объема воды к липидам, которое в четыре раза выше, чем липосомы, встряхиваемые вручную или многослойные липосомы [19, 20].

Вкратце, сначала эмульсия вода-в-масле формируется путем кратковременной обработки ультразвуком двухфазной системы, содержащей фосфолипиды в органическом растворителе, таком как изопропиловый эфир или диэтиловый эфир, или смесь изопропилового эфира и хлороформа с водным буфером. Органические растворители отделяются при пониженном давлении, что приводит к образованию вязкого геля. Липосомы приобретают форму, когда остаточный растворитель удаляется во время непрерывного роторного испарения при пониженном давлении. С помощью этого метода можно получить высокую эффективность капсулирования до 65% в среде с низкой ионной силой, например 0.01 М NaCl. Этот метод использовался для инкапсуляции малых, больших и макромолекул. Основным недостатком метода является контакт инкапсулируемых материалов с органическими растворителями и короткие периоды обработки ультразвуком. Эти условия могут привести к разрыву цепей ДНК или денатурации некоторых белков [32]. Модифицированный метод испарения с обращенной фазой был представлен Handa et al., И главное преимущество этого метода заключается в том, что липосомы обладают высокой эффективностью инкапсуляции (около 80%) [33].

Метод удаления детергента (удаление некапсулированного материала)

Диализ

Детергенты в их критических концентрациях мицелл (CMC) использовались для солюбилизации липидов. По мере отделения детергента мицеллы становятся все более обогащенными фосфолипидом и, наконец, объединяются, образуя LUV. Детергенты удаляли диализом [34–36]. Коммерческое устройство под названием LipoPrep (Diachema AG, Швейцария), которое является версией диализной системы, доступно для удаления детергентов.Диализ можно проводить в диализных мешках, заполненных большими буферами, не содержащими детергентов (равновесный диализ) [17].

Моющее средство (холат, алкилгликозид, Тритон X-100) удаление смешанных мицелл (абсорбция)

Абсорбция детергента достигается встряхиванием смешанного раствора мицелл с гранулированными органическими адсорберами полистирола, такими как шарики XAD-2 (SERVA Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Германия) и Bio-beads SM2 (Bio-RadLaboratories, Inc., Hercules, США). Большим преимуществом использования адсорберов моющего средства является то, что они могут удалять не полностью исчерпанные моющие средства с очень низким содержанием КМЦ.

Гель-проникающая хроматография

В этом методе детергент обедняется специальной хроматографией по размеру. Для гель-фильтрации можно использовать сефадекс G-50, сефадекс G-100 (Sigma-Aldrich, Миссури, США), сефароза 2B-6B и сефакрил S200-S1000 (General Electric Company, Тегеран, Иран). Липосомы не проникают в поры шариков, упакованных в колонку. Они просачиваются через промежутки между бусинами. При низких скоростях потока отделение липосом от мономеров детергента очень хорошее.Набухшие полисахаридные шарики адсорбируют значительные количества амфифильных липидов; поэтому необходима предварительная обработка. Предварительная обработка осуществляется путем предварительного насыщения гель-фильтрационной колонки липидами с использованием пустых липосомных суспензий.

Разведение

При разбавлении водного смешанного мицеллярного раствора детергента и фосфолипидов буфером размер мицелл и полидисперсность существенно увеличиваются, а при разбавлении системы за пределами границы смешанной мицеллярной фазы происходит самопроизвольный переход от полидисперсных мицелл к везикулам. .

Липосомы Stealth и обычные липосомы

Хотя липосомы подобны биомембранам, они все же являются инородными телами. Следовательно, липосомы известны мононуклеарной фагоцитарной системе (MPS) после контакта с белками плазмы. Соответственно, липосомы выводятся из кровотока.

Эти трудности со стабильностью решаются за счет использования синтетических фосфолипидов, частиц, покрытых амфипатическим полиэтиленгликолем, покрытия липосом производными хитина, сублимационной сушки, полимеризации, микрокапсулирования ганглиозидов [17].

Покрытие липосом ПЭГ снижает процент поглощения макрофагами и приводит к продолжительному присутствию липосом в кровотоке и, следовательно, дает этим липосомам достаточно времени для утечки из кровотока через негерметичный эндотелий.

Скрытая липосома — это везикула сферической формы с мембраной, состоящая из фосфолипидного бислоя, используемая для доставки лекарств или генетического материала в клетку. Липосома может состоять из фосфолипидов природного происхождения со смешанными липидными цепями, покрытыми полимерами PEG и коллоидными по своей природе или стабилизированными ими.Стелс-липосомы получают и выращивают для доставки новых лекарств и с контролируемым высвобождением. Этот принцип скрытности был использован для разработки успешного липосомного продукта, содержащего доксорубицин, который в настоящее время продается как Doxil (Janssen Biotech, Inc., Хоршам, США) или Caelyx (Schering-Plough Corporation, Кенилворт, США) для лечения солидных опухолей. . Недавно были описаны впечатляющие терапевтические улучшения с использованием липосом, нагруженных кортикостероидами, на экспериментальных моделях артрита. Проблема применения скрытых липосом заключается в их способности ускользать из кровообращения.Однако липосомы с длительной циркуляцией могут также действовать как резервуар для пролонгированного высвобождения терапевтического агента. Фармакологическое действие вазопрессина сформулировано в липосомах с длинной циркуляцией [37, 38].

Нагрузка лекарством в липосомах

Нагрузка лекарством может быть достигнута либо пассивно (т.е. лекарство инкапсулируется во время образования липосом), либо активно (т.е. после образования липосом). Гидрофобные лекарственные средства, например, таксол амфотерицина В или аннамицин, могут быть непосредственно объединены в липосомы во время образования везикул, а степень поглощения и удержания регулируется взаимодействием лекарственного средства с липидом.Эффективность захвата 100% часто достижима, но это зависит от растворимости лекарства в липосомной мембране. Пассивная инкапсуляция водорастворимых лекарств зависит от способности липосом улавливать водный буфер, содержащий растворенное лекарство, во время образования везикул. Эффективность улавливания (обычно <30%) ограничена уловленным объемом, ограниченным липосомами, и растворимостью лекарства. С другой стороны, водорастворимые препараты с протонизируемыми аминогруппами могут быть активно захвачены с помощью градиентов pH [39], что может привести к эффективности улавливания, приближающейся к 100% [40].

Средство для защиты липосом от замерзания (лиофилизация)

Природные экстракты обычно разлагаются из-за окисления и других химических реакций, прежде чем они попадут в целевой участок. Сублимационная сушка была стандартной практикой, применяемой при производстве многих фармацевтических продуктов. Подавляющее большинство этих продуктов лиофилизируется из простых водных растворов. Классически вода является единственным растворителем, который необходимо отделить от раствора с помощью процесса сублимационной сушки, но все еще есть много примеров, когда фармацевтические продукты производятся с помощью процесса, который требует сублимационной сушки из систем органических сорастворителей [14].

Сублимационная сушка (лиофилизация) включает удаление воды из замороженных продуктов при чрезвычайно низком давлении. Этот процесс обычно используется для сушки термолабильных продуктов, которые могут быть разрушены при тепловой сушке. Этот метод имеет слишком большой потенциал как метод решения проблем долгосрочной стабильности с восхищением липосомальной стабильностью. Исследования показали, что утечка захваченных материалов может происходить в процессе сублимационной сушки и при восстановлении.Недавно было показано, что липосомы при лиофилизации в присутствии адекватного количества трегалозы (углевода, обычно обнаруживаемого в высоких концентрациях в организме) сохраняют до 100% своих исходных веществ. Это показывает, что трегалоза является отличным криопротектором (замораживающим средством) для липосом. Размеры сублимационных сушилок варьируются от небольших лабораторных моделей до крупных промышленных установок, поставляемых поставщиками фармацевтического оборудования [41].

Механизм транспортировки через липосомы

Ограничения и преимущества липосомных носителей лекарственных средств в решающей степени зависят от взаимодействия липосом с клетками и их предназначения in vivo после введения. In vivo и in vitro Исследования контактов с клетками показали, что основным взаимодействием липосом с клетками является либо простая адсорбция (за счет специфических взаимодействий с компонентами клеточной поверхности, электростатических сил или неспецифических слабогидрофобных) или после эндоцитоза (фагоцитирующими клетками ретикулоэндотелиальной системы, например макрофагами и нейтрофилами).

Слияние с мембраной плазматической клетки путем встраивания липидного бислоя липосомы в плазматическую мембрану с одновременным высвобождением содержимого липосом в цитоплазму встречается очень редко.Четвертое возможное взаимодействие — это обмен компонентов бислоя, например холестерина, липидов и мембраносвязанных молекул, с компонентами клеточных мембран. Часто бывает трудно определить, какой механизм функционирует, и одновременно может функционировать более одного [42–44].

Фузогенные липосомы и липосомы, опосредованные антителами в терапии рака

Нечасто известно, что мощное противораковое лекарство, особенно такое, которое нацелено на цитоплазму или ядро ​​клетки, не работает из-за низкой проницаемости через плазматическую мембрану. деградация лизосомальными ферментами через эндоцитоз-зависимый путь и по другим причинам.Таким образом, большое внимание при использовании систем доставки лекарств сосредоточено на преодолении этих проблем, что в конечном итоге приводит к индукции максимальной способности противоракового лекарственного средства. В связи с этим была разработана новая модель терапии рака с использованием новой системы доставки лекарств — фузогенных липосом [45].

Фузогенные липосомы состоят из инактивированного ультрафиолетом вируса Сендай и обычных липосом. Фузогенные липосомы эффективно и напрямую доставляют свое инкапсулированное содержимое в цитоплазму с использованием механизма слияния вируса Сендай, тогда как обычные липосомы поглощаются эндоцитозом фагоцитарными клетками ретикулоэндотелиальной системы, например макрофагами и нейтрофилами.Таким образом, фузогенные липосомы являются хорошим кандидатом в качестве носителя для доставки лекарств в цитоплазму независимо от эндоцитоза [45].

Липосомные системы доставки лекарств обеспечивают стабильный состав, обеспечивают лучшую фармакокинетику и делают доступной степень «пассивного» или «физиологического» нацеливания на ткань опухоли. Однако эти переносчики не нацелены напрямую на опухолевые клетки. Модификации конструкции, которые защищают липосомы от нежелательных взаимодействий с белками плазмы и клеточными мембранами, которые отличают их от реактивных носителей, например катионных липосом, также предотвращают взаимодействия с опухолевыми клетками.В качестве альтернативы, после экстравазации в опухолевую ткань липосомы остаются в строме опухоли в виде депо, загруженного лекарством. Липосомы в конечном итоге подвергаются ферментативной деградации и / или фагоцитарной атаке, что приводит к высвобождению лекарства для последующей диффузии в опухолевые клетки. Следующее поколение разрабатываемых носителей лекарств направляет молекулярное нацеливание на раковые клетки посредством опосредованных антителами или других лиганд-опосредованных взаимодействий [17, 45].

Применение липосом в медицине и фармакологии

Применение липосом в медицине и фармакологии можно разделить на диагностические и терапевтические применения липосом, содержащих различные маркеры или лекарства, и их использование в качестве инструмента, модели или реагента в базовых исследованиях. клеточных взаимодействий, процессов распознавания и механизма действия определенных веществ [43].

К сожалению, многие лекарства имеют очень узкое терапевтическое окно, а это означает, что терапевтическая концентрация не намного ниже токсичной. В некоторых случаях токсичность может быть уменьшена или эффективность может быть увеличена путем использования подходящего носителя лекарственного средства, который изменяет временную и пространственную доставку лекарственного средства, то есть его биораспределение и фармакокинетику. Из многих доклинических и клинических исследований ясно, что лекарственные препараты, например противоопухолевые препараты, в составе липосомной демонстрации снижают токсичность, в то время как сохраняющиеся повышают эффективность.

Достижения в области дизайна липосом приводят к новым приложениям для доставки новых биотехнологических продуктов, например антисмысловых олигонуклеотидов, клонированных генов и рекомбинантных белков. Обширная литература определяет жизнеспособность рецептуры широкого диапазона консервативных лекарств в липосомах, что часто приводит к улучшенной терапевтической активности и / или снижению токсичности по сравнению со свободным лекарственным средством. В целом, изменение фармакокинетики липосомальных лекарственных средств может привести к улучшенной биодоступности лекарственного средства для определенных клеток-мишеней, которые живут в кровотоке, или, что более важно, для внесосудистых участков заболевания, например опухолей.Недавние усовершенствования включают липосомальные препараты, содержащие полностью транс -ретиноевую кислоту [46, 47] и даунорубицин [48–51], которые были одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов в качестве первой линии лечения распространенной саркомы Капоши, связанной со СПИДом. Яркими примерами являются винкристин, доксорубицин и амфотерицин B [38].

Преимущества лекарственной нагрузки в липосомах, которые могут применяться в виде (коллоидного) раствора, аэрозоля или (пол) твердых форм, таких как кремы и гели, можно суммировать по семи категориям [44] (Таблица 2):

Липосомы при паразитарных заболеваниях и инфекциях

С тех пор, как обычные липосомы перевариваются фагоцитарными клетками в организме после внутривенного введения, они становятся идеальными носителями для нацеливания молекул лекарства в эти макрофаги.Наиболее известными примерами этого механизма «троянского коня» являются несколько паразитарных заболеваний, которые обычно существуют в клетках MPS. Они включают лейшманиоз и несколько грибковых инфекций.

Лейшманиоз — это паразитарная инфекция макрофагов, поражающая более 100 миллионов человек в тропических регионах и часто смертельная. Эффективная доза препаратов, в основном различных сурьмяных, не намного ниже токсической. Липосомы накапливаются в той же популяции клеток, которая инфицирована, поэтому был предложен идеальный носитель для доставки лекарств [52].Конечно, терапевтический индекс у грызунов увеличивался в несколько сотен раз при введении препарата в различных липосомах. Неожиданно и, к сожалению, не было особого интереса к расширению масштабов составов и их клиническому одобрению после нескольких очень обнадеживающих исследований, датируемых 1978 годом. Только сейчас продолжается несколько исследований различных антипаразитарных липосомных составов на людях. Эти составы используют в основном ионосферный амфотерицин В и трансплантируются из очень успешной и плодовитой области липосомальных составов в противогрибковой терапии.

Наилучшие результаты, о которых сообщалось до сих пор в терапии людей, — это, вероятно, липосомы как носители форамфотерицина B в противогрибковой терапии. Это препарат выбора при рассеянных грибковых инфекциях, которые часто работают параллельно с химиотерапией, иммунной системой или СПИДом и часто приводят к летальному исходу. К сожалению, сам по себе препарат очень токсичен, и его дозировка ограничена из-за его ионосферы и нейротоксичности. Эта токсичность обычно связана с размером молекулы лекарства или его комплекса.Очевидно, что липосомная инкапсуляция подавляет накопление лекарства в этих органах и радикально снижает токсичность [53]. Кроме того, часто грибок существует в клетках мононуклеарной фагоцитарной системы; следовательно, инкапсуляция приводит к снижению токсичности и пассивному нацеливанию. Эти преимущества, однако, могут быть связаны с любым коллоидным носителем лекарственного средства. Конечно, аналогичные улучшения в терапии наблюдались при использовании стабильных смешанных мицеллярных препаратов и микроэмульсий [54]. Кроме того, кажется, что многие из ранних липосомальных препаратов на самом деле были жидкокристаллическими коллоидными частицами, а не самозакрывающимися MLV.Поскольку жизни первых неизлечимо больных пациентов (которые не полагались на все традиционные методы лечения) были спасены [53], многих пациентов очень эффективно лечили различными формами амфотерицина B.

Сопоставимые методы могут быть достигнуты в противовирусной и антибактериальной терапии [55]. Однако большинство антибиотиков доступно перорально; инкапсуляция липосом может рассматриваться только в случае очень сильнодействующих и токсичных липосом, которые вводятся парентерально. Приготовление насыщенных антибиотиками липосом с разумно высоким соотношением лекарственного средства к липидам может быть нелегким из-за взаимодействия этих молекул с бислоями и высокой плотности их водных растворов, которые часто заставляют липосомы плавать в виде кремообразного слоя на поверхности. трубка.Также рассматриваются несколько других способов, например местное или легочное (путем ингаляции). Инкапсулированные в липосомы противовирусные препараты (например, рибавирин, азидотимидин или ацикловир) также снижают токсичность; в настоящее время проводятся более подробные эксперименты в отношении их эффективности.

Липосомы в противоопухолевой терапии

Было показано, что многочисленные различные липосомные композиции многочисленных противораковых агентов менее токсичны, чем свободное лекарство [56-59].Антрациклины — это лекарственные средства, которые останавливают рост делящихся клеток путем внедрения в ДНК и, таким образом, убивают в основном быстро делящиеся клетки. Эти клетки находятся не только в опухолях, но также в волосах, слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта и клетках крови; следовательно, этот класс препаратов очень токсичен. Наиболее используемым и изученным является адриамицин (коммерческое название доксорубицина HCl; Ben Venue Laboratories, Бедфорд, Огайо). В дополнение к вышеупомянутым острым токсическим эффектам, его дозировка ограничена его увеличивающейся кардиотоксичностью.Были перепробованы многочисленные разнообразные составы. В большинстве случаев токсичность снижалась примерно до 50%. К ним относятся как острая, так и хроническая токсичность, поскольку инкапсуляция липосом снижает доставку молекул лекарства к этим тканям. По той же причине эффективность во многих случаях снижалась из-за сниженной биодоступности препарата, особенно если опухоль не была фагоцитарной или локализовалась в органах мононуклеарной фагоцитарной системы. В некоторых случаях, таких как системная лимфома, эффект инкапсуляции липосом показал повышенную эффективность из-за эффекта длительного высвобождения, т.е.например, более длительное присутствие терапевтических концентраций в кровотоке [60–62], в то время как в некоторых других случаях секвестрация препарата в ткани мононуклеарной фагоцитарной системы фактически снижала его эффективность.

Применение у человека в целом показало снижение токсичности и лучшую переносимость введения при не слишком обнадеживающей эффективности.